Анализ мутаций в генах, ассоциированных с развитием болезни Паркинсона, у пациентов Красноярского края

Abstract

Цель исследования – анализ мутаций в генах SNCA, PARK2, PINK1, DJ1, ATP13A2 и LRRK2 методом MLPA-анализа среди пациентов Красноярского края с диагнозом болезнь Паркинсона (БП). Исходя из поставленной цели, были сформулированы следующие задачи: 1. Проанализировать ДНК 76 пациентов с диагнозом БП методом MLPA с помощью набора реагентов SALSA MLPA P051 Parkinson mix 1 (MRC-Holland). 2. Разработать анализ мутаций p.G2019S, p.R1441G и p.R1441С в гене LRRK2 методом аллель-специфичной ПЦР-РВ и проанализировать ДНК 76 пациентов с диагнозом БП. 3. Разработать анализ мутаций p.G2019S, p.R1441G и p.R1441С в гене LRRK2 методом секвенирования по Сэнгеру. 4. Описать полученные результаты. Актуальность диссертационной работы заключается в том, что БП является мультифакторным заболеванием, для которого на сегодняшний день не изучены полностью причины и механизмы развития, а также не решена проблема своевременной диагностики. Показано, что мутации в некоторых генах достоверно ассоциированы с развитием семейных форм БП, а также могут являться причиной и спорадических случаев заболевания, однако распространенность данных мутаций в российской популяции, и в частности в Красноярском крае, изучена слабо. Вместе с тем, информация о частоте встречаемости различных причинных мутаций среди пациентов с БП в конкретных регионах страны, в том числе и в Красноярском крае, необходима как в рамках фундаментального исследования патогенеза БП, так и для генетического консультирования пациентов и их родственников. В ходе работы было проанализировано 76 пациентов с БП на наличие мутаций в генах SNCA, PARK2, PINK1, DJ1, ATP13A2 и LRRK2, а также обследованы 3 дочери пациента c семейной формой заболевания, у которого была выявлена мутация p.G2019S в гене LRRK2. Анализ вышеперечисленных генов проводился методом мультиплексной лигазной реакции с амплификацией (MLPA), наличие мутации подтверждалось методом секвенирования по Сенгеру. Собранный анамнез и генетическое обследование данной семьи согласуются с литературными данными о том, что фенотипически форма LRRK2-БП схожа с идиопатической формой БП (иБП) и не имеет уникальных клинических особенностей течения. Выявленная частота встречаемости мутаций в гене LRRK2 среди пациентов с БП в данном исследовании (1,3%) соответствует таковой среди пациентов с БП в европейских популяциях (1 – 4%). Также был проведен скрининг мутаций p.G2019S, p.R1441G и p.R1441С в гене LRRK2 методом аллель-специфичной ПЦР-РВ для данных 76 пациентов, мутации p.R1441G и p.R1441С выявлены не были, мутация p.G2019S была подтверждена только для ранее упомянутого пациента и не выявлена ни у кого более. Таким образом, по результатам представленного исследования можно заключить, что для пациентов с БП Красноярского края распространенность мутаций в генах SNCA, PARK2, PINK1, DJ1 и ATP13A2, вероятно, крайне низка (в данной работе равна нулю), а для гена LRRK2 скрининг мутации p.G2019S среди пациентов с БП вполне можно считать актуальным.