Bioluminescent monitoring enables observation of intracellular events in real time without cell and tissue destruction

Abstract

Секретируемые репортеры обеспечивают мониторинг внутриклеточных событий в реальном времени без разрушения клеток. Для создания клеточных линий меланомы человека с возможностью неинвазивного биолюминесцентного мониторинга метаболической активности проведено сравнение эффективности изоформ и мутантных вариантов люциферазы из Metridia longa в качестве секретируемых репортеров в клетках линии меланомы человека Mel IL. Из исследованных двух изоформ и двух делеционных мутантов секретируемой люциферазы M. longa при трансфекции клеток меланомы Mel IL наибольшую активность в среде обнаружил делеционный мутант MLM3. Установлено, что оптимизация структуры гена выбранного варианта MLM3 для экспрессии в клетках человека еще почти на порядок увеличивает уровень биолюминесцентной активности в клетках Mel IL. Стабильная клеточная линия меланомы Mel IL с конститутивной экспрессией гуманизированного репортера hMLM3 получена и охарактеризована. Линейный диапазон идентификации живых клеток по активности hMLM3 репортера составлял более трех порядков с чувствительностью детекции, достигающей 10 клеток.