Функциональные характеристики NADH:FMN-оксидоредуктазы из lux-оперона светящихся бактерий Photobacterium leiognathi

Abstract

Проведено исследование функциональных характеристик NAD(F)H:FMN – оксидоредуктазы из lux-оперона светящихся бактерий Photobacterium leiognathi, а также сравнение сравнение со свойствами NAD(F)H:FMN-оксидоредуктазы из Vibrio fischeri (FRase I). В результате работы были определены оптимальные условия функционирования фермента (pH 7,5, t = 35° С). Установлено, что ДТТ позволяет сохранить стабильность белка во времени. Вязкие агенты влияют на исследуемые ферменты по-разному: активность FRase I снижается как в глицирине, так и в сахарозе, в то время как активность LuxG в глицерине увеличивается. При сравнении интенсивности биолюминесценции биферментных систем получено, что ля системы с FRase I Кm* = 0,43±0,15 µМ, с LuxG Кm* = 5,2±0,7 µМ. Выяснено, что скорость окисления NADH LuxG выше в отсуствии FMN в реакционной среде. Исследуемы фермент не подчиняется кинетике Михаэлиса-Ментен.