Разработка и сравнительная апробация методик для повышения чувствительности определения мутации V617F в гене JAK2 методом пиросеквенирования
Скачать файл:
Автор:
Дунаева, Е. А.
Миронов, К. О.
Субботина, Т. Н.
Ольховский, И. А.
Шипулин, Г. А.
Коллективный автор:
Институт фундаментальной биологии и биотехнологии
Кафедра медицинской биологии
Дата:
2017-01Журнал:
Klinichescheskaya Laboratornaya DiagnostikaКвартиль журнала в Scopus:
Q4Библиографическое описание:
Дунаева, Е. А. Разработка и сравнительная апробация методик для повышения чувствительности определения мутации V617F в гене JAK2 методом пиросеквенирования [Текст] / Е. А. Дунаева, К. О. Миронов, Т. Н. Субботина, И. А. Ольховский, Г. А. Шипулин // Klinichescheskaya Laboratornaya Diagnostika. — 2017. — Т. 2017 (№ 2). — С. 125-128Аннотация:
Чувствительность методов, используемых для обнаружения соматической мутации V617F в гене JAK2, определяет возможности раннего выявления хронических миелопролиферативных опухолей (ХМО). Мутация V617F также может быть обнаружена у лиц, не имеющих развернутой картины гематологических заболеваний, и определение мутации даже в низких концентрациях ассоциировано с повышением риска церебрального инсульта и тромбоза артериальных и венозных сосудов. Цель данной работы заключалась в разработке методик, основанных на COLD-ПЦР и аллель-специфичной ПЦР, направленных на повышение чувствительности выявления мутации V617F, определяемой с помощью пиросеквенирования. Аналитическую чувствительность методик оценивали на контрольных образцах с различными соотношениями аллелей. Для аллель-специфичной ПЦР аналитическая чувствительность составила 0,25% мутантного аллеля при концентрации анализируемого контрольного образца 103 копий ДНК/мкл; для COLD-ПЦР - 0,5% при концентрации 104 копий ДНК/мкл. Проведена сравнительная апробация методик на клиническом материале, полученном от 106 пациентов с подозрением на ХМО. При исследовании клинических образцов методом COLD-ПЦР было обнаружено 13 (14%), а методом аллель-специфичной ПЦР - 15 (16%) положительных образцов. Во всех 15 случаях обнаружения мутации было получено клиническое подтверждение диагноза ХМО. Предложенные методики позволяют увеличить эффективность амплификации мутантной ДНК в исследуемых образцах и тем самым повысить чувствительность последующего анализа продуктов амплификации методом пиросеквенирования, что позволяет рекомендовать использование методик для подтверждения диагноза ХМО и раннего выявления лиц с повышенным риском развития венозных и артериальных тромбозов.