Показать сокращенную информацию
Са<sup>2+</sup>-регулируемый фотопротеин обелин как N-концевой партнер при конструировании слитых белков
Автор | Еремеева, Е.В. | ru |
Автор | Eremeeva, Elena V. | en |
Автор | Франк, Л.А. | ru |
Автор | Frank, Ludmila A. | en |
Автор | Маркова, С.В. | ru |
Автор | Markova, Svetlana V. | en |
Автор | Высоцкий, Е.С. | ru |
Автор | Vysotski, Eugene | en |
Дата внесения | 2011-03-17T07:05:20Z | |
Дата, когда ресурс стал доступен | 2011-03-17T07:05:20Z | |
Дата публикации | 2010-12 | en |
URI (для ссылок/цитирований) | https://elib.sfu-kras.ru/handle/2311/2248 | |
Аннотация | Са<sup>2+</sup>-регулируемые фотопротеины, генетически слитые с биоспецифическими полипептидами, широко используются как репортеры для внутриклеточного мониторинга Са<sup>2+</sup>, а также в анализе in vitro. Ранее было показано, что модификации фотопротеина акворина по С-концу приводят к потере его биолюминесцентной активности, поэтому химерные белки получали только присоединением полипептида к его N-концу. В представленной работе исследуется возможность получения слитых белков по С-концу другого фотопротеина - обелина. При этом вначале обелин (OL) генетически удлинили на одну аминокислоту - тирозин (Y), а затем получили обелин, слитый через длинный гибкий линкер (31 аминокислота) с зеленым флуоресцентным белком медузы Clytia gregaria (cgreGFP). Оба белка (OL-Y и OL-cgreGFP) были выделены, их основные свойства изучены. Показано, что OL-Y образует устойчивый фотопротеиновый комплекс, биолюминесцентная активность которого составляет 75 % активности обелина дикого типа (WT-OL). Активность OL-cgreGFP составляет 46 % от активности WT-OL. При запуске биолюминесцентной реакции ионами кальция наблюдается эффективный резонансный перенос энергии, в котором обелиновая часть химерного белка является донором, а cgreGFP - акцептором энергии. Таким образом установлено, что репортерные молекулы на основе Ca<sup>2+</sup>-регулируемого фотопротеина обелина могут быть получены генетическим слиянием с биоспецифическими полипептидами по его С-концу. | ru |
Аннотация | Ca<sup>2+</sup>-regulated photoproteins genetically fused with biospecific polipeptides have been extensively used in intracellular Ca<sup>2+</sup> measurements and in the development of binding assays. Gene fusions to aequorin have been limited to its N-terminus, since as previous studies indicated the protein loses bioluminescent activity upon modification of its C-terminus. To investigate this in regard to another photoprotein - obelin (OL) the one was elongated at its C-terminus with tyrosine (Y) and then fused with green fluorescent protein Clytia gregaria (cgreGFP) through the flexible 31 aa linker. Both proteins (OL-Y and OL-cgreGFP) were isolated and investigated. The OL-Y was found to form a stable photoprotein comlex, possessing 75 % of WT-OL bioluminescent activity. OL-cgreGFP activity preserves 46 % of WT-OL activity and demonstrates an effective resonance energy transfer, where OL-partner and cgreGFP-partner are energy donor and acceptor respectively. Thus, it was shown that the labels on the base of Ca<sup>2+</sup>-regulated photoprotein obelin may be obtained by fusing with biospecific polypeptides regardless its termini. | en |
Язык | en | en |
Издатель | Сибирский федеральный университет. Siberian Federal University. | en |
Является частью серии | 2010 3 ( 4 ) | en |
Является частью серии | Журнал Сибирского федерального университета. Биология. Journal of Siberian Federal University. Biology. | en |
Тема | обелин | ru |
Тема | генетическое удлинение по С-концу | ru |
Тема | cgreGFP | ru |
Тема | obelin | en |
Тема | C-end fusing | en |
Тема | cgreGFP | en |
Название | Са<sup>2+</sup>-регулируемый фотопротеин обелин как N-концевой партнер при конструировании слитых белков | ru |
Альтернативное название | Ca<sup>2+</sup>-regulated Photoprotein Obelin as N-terminal Partner in the Fusion Proteins | en |
Тип | Journal Article | |
Тип | Published Journal Article | |
Контакты автора | Еремеева, Е.В. : Институт биофизики СО РАН , Россия, 660036, Красноярск, Академгородок | ru |
Контакты автора | Eremeeva, Elena V. : Institute of Biophysics SB RAS , Russia, 660036, Krasnoyarsk, Akademgorodok | en |
Контакты автора | Франк, Л.А. : Институт биофизики СО РАН Сибирский федеральный университет , Россия, 660036, Красноярск, Академгородок Россия, 660041, Красноярск, пр.Свободный, 79 , e-mail: lfrank@yandex.ru | ru |
Контакты автора | Frank, Ludmila A. : Institute of Biophysics SB RAS Siberian Federal University , Russia, 660036, Krasnoyarsk, Akademgorodok Russia, 660041, Krasnoyarsk, Svobodny av., 79 , e-mail: lfrank@yandex.ru | en |
Контакты автора | Маркова, С.В. : Институт биофизики СО РАН Сибирский федеральный университет , Россия, 660036, Красноярск, Академгородок Россия, 660041, Красноярск, пр.Свободный, 79 | ru |
Контакты автора | Markova, Svetlana V. : Institute of Biophysics SB RAS Siberian Federal University , Russia, 660036, Krasnoyarsk, Akademgorodok Russia, 660041, Krasnoyarsk, Svobodny av., 79 | en |
Контакты автора | Высоцкий, Е.С. : Институт биофизики СО РАН , Россия, 660036, Красноярск, Академгородок | ru |
Контакты автора | Vysotski, Eugene : Institute of Biophysics SB RAS , Russia, 660036, Krasnoyarsk, Akademgorodok | en |
Страницы | 372-383 | en |