Исследование диагностического значения микроРНК при множественной миеломе

Abstract

Цель работы: разработка диагностических тест – систем для детекции микроРНК miR-15a, miR-16, miR-21, miR-221 и miR-222 в пробах венозной крови и оценка их диагностического значения при множественной миеломе. Задачи: 1. Подобрать оптимальный протокол выделения микроРНК; 2. Осуществить дизайн праймеров и зондов и оптимизировать условия для проведения реакций обратной транскрипции; 3. Осуществить дизайн праймеров и зондов и оптимизировать условия для проведения реакций ПЦР в реальном времени; 4. Изучить диагностическое значение уровней микроРНК при ММ в сравнении с группой контроля. Разработка способов диагностики онкогематологических заболеваний на основе количественного определения микроРНК признается одним из перспективных направлений лабораторной диагностики. Множественная миелома представляет собой 2-ое по распространенности онкогематологическим заболеванием, морфологическим субстратом которого являются плазматические клетки. В литературных источниках наиболее часто описываются сдвиги уровней экспрессии микроРНК miR-15a, miR-16, miR-21, miR-221 и miR-222 при ММ, однако доступных для клинического использования наборов для диагностики, основанных на технологии ПЦР в настоящее время нет. Помимо этого, в литературных источниках отсутствуют исследования, направленные на их одновременный анализ в пробах крови методом ПЦР при ММ. В результате проведённых исследований разработано 5 тест-систем для специфического анализа уровня 5 микроРНК, с использованием которых было выявлено, что уровень микроРНК miR-16 статистически значимо снижается, а уровень miR-21 и miR-222 – повышается в пробах плазмы крови у первичных пациентов с ММ по сравнению с донорами. На основе полученных данных разработано 2 способа диагностики множественной миеломы с использованием коэффициентов miR-21/miR-16 и miR-16/(miR-21+miR-222) для проб плазмы венозной крови.