Алгоритм генетического обследования пациентов с эритроцитозом

Abstract

Эритроцитозом называют патологическое состояние, характеризующееся увеличением количества эритроцитов, концентрации гемоглобина (Hb) и уровня гематокрита (Ht). Причины эритроцитоза разнообразны и могут быть в целом разделены на первичные и вторичные, которые в свою очередь делятся на врожденные и приобретённые. При проведении дифференциальной диагностики эритроцитозов с целью исключения такого клонального заболевания как истинная полицитемия необходимым этапом, согласно ВОЗ, является анализ на наличие мутаций в гене JAK2 в 12 и 14 экзонах. Важно отметить, что в последнее время в литературе встречаются данные о редких случаях выявления мутаций в гене CALR у пациентов с первичным приобретённым эритроцитозом или истинной полицитемией, тогда как обычно CALR мутации ассоциированы с такими фенотипическими вариантами хронических миелопролиферативных неоплазм (ХМН), как эссенциальная тромбоцитемия (ЭТ) и миелофиброз (МФ). Вследствие этого ставится вопрос о необходимости проведения анализа мутаций в гене CALR пациентам с эритроцитозом, а также внесением дополнений в алгоритм генетического исследования пациентов с эритроцитозом. Кроме этого, для пациентов отрицательных по JAK2 и CALR, у которых не было выявлено мутаций ответственных за развитие клонального заболевания, необходимо проводить исследование в генах кислород – чувствительного пути (EPOR, VHL, HIF2α), которые участвуют в развитие различных типах семейного эритроцитоза (ECTY1 – 4) Цель данной работы – пересмотреть и дополнить алгоритм генетического обследования пациентов с эритроцитозом. Анализ мутаций в гене CALR у пациентов с эритроцитозом проводили с использованием гетеродуплексного анализа и с детекцией продуктов амплификации в вертикальном ПААГ. Исследование на наличие мутаций в генах EPOR, VHL, HIF2α, ответственных за развитие первичного и вторичного эритроцитозов проводили с использованием секвенирования по Сенгеру. В ходе работы была разработана технология исследования мутаций в гене CALR методом гетеродуплексного анализа и с детекцией продуктов амплификации в вертикальном ПААГ, а также в генах EPOR, VHL, HIF2α методом секвенирования по Сенгеру для дифференциальной диагностики эритроцитозов. Из 38 пациентов с эритроцитозами неясной этиологии, отобранных за период 2012–2016 гг (путем исключения пациентов с выявленными соматическими мутациями в 14 и 12 экзонах гена JAK2) диагнозы были уточнены для 8 человек. Так, для одного из 8-ми пациентов был подтвержден диагноз истинная полицетемия (клональное онкогематологическое заболевании – рак крови), а у других 7-ми пациентов выявлены мутации, ассоциированные с различными типами семейных эритроцитозов, в частности: для двух пациентов подтвержден диагноз семейного эритроцитоза первого типа (ECTY1), для других двух пациентов подтвержден диагноз семейного эритроцитоза второго типа (ECTY2), и для трёх пациентов подтвержден диагноз семейного эритроцитоза четвертого типа (ECTY4).